Becoming With Schizophyllum Commune: Opret en steril kultur fra fundne svampe: 3 trin (med billeder)

2024 Forfatter: John Day | [email protected]. Sidst ændret: 2024-01-30 08:29

Denne instruktive er fokuseret på at forklare, hvordan man skaber en steril kultur af svampen Schizophyllum Commune (almindeligt navn Split Gill -svamp) på en petriskål ved hjælp af fundne svampe. Schizophyllum Commune har vist sig at have over 28.000 køn, kan findes på alle kontinenter undtagen Antarktis og har evnen (som andre "hvide og brune rotssvampe") til at nedbryde hormonforstyrrende forurening (plast, hormonlignende industrielle petrokemikalier som f.eks. gødningen Atrazine, blødgøreren Bisphenol-A eller det syntetiske hormon Diethylstilbestrol).

Jeg vil gennemgå teknikker til identifikation af vilde svampe, hvordan man laver en petriskål med agar til næringsstoffer, og hvordan man bruger dine fundne svampe til at dyrke en steril isoleret kultur i din petriskål. Andre instruktører i denne serie går over teknikker såsom genetisk identifikation af svampe, enkle enzymatiske assays for at teste svampens evne til at nedbryde plast og hormonlignende forurening, og hvordan man laver ost med S. Commune.

Dette projekt kom ud af samarbejdsarbejdet mellem Mary Maggic, Paula Pin og mig selv under et ophold i HANGAR i Barcelona Spanien efterår september 2018. For mere info om projektet, læs videre ~ ~ eller spring over hele Bla Bla og gå direkte til Step 1 til selvstudiet:)

Billeder er fra Schizophyllum Commune Fanzine ~ filer kan downloades gratis her

Under opholdet var vores tre hovedmål at:

1 ~ Undersøg og fordøj den videnskabelige litteratur om Schizophyllum Commune, og det er forskellige interaktioner med hormoner og hormonforstyrrende petrokemiske forurenende stoffer. S. Commune er en af mange "hvide og brune rådne" svampe med evnen til at nedbryde hormonforstyrrende og hormonforstyrrende forurening. Disse svampe lever af træer ved at udskille "lignocellulosiske" enzymer fra deres netværkslegemer eller "mycelia", og enzymerne er i stand til at nedbryde den cellulose og lignin, som træer er lavet af. På grund af strukturelle ligheder mellem cellulose, lignin og EDS ' / hormoner som Atrazine, BPA, Estradiol, Diethylstilbestrol og Nonylphenols kan de "lignocellulose" enzymer, der udskilles af svampene, også nedbryde en lang række toksiske stoffer. Ud over dette producerer S. Commune immunstimulerende polysaccharider, der er nyttige som kræftforebyggende midler og behandlinger (Godkendt i Japan til behandling af livmoderhalskræft), kan forbedre fytoøstrogene egenskaber hos visse planter gennem gæring, kan bruges i stedet for løbe og lactobacilius i ostfremstillingsprocesser og producerer enzymer, der opløser thrombinpropper (nyttige til behandling af trombose). Mærkeligt nok bruges de samme "beta-glucaner", der kan ekstraheres med kogende vand som kræftbehandlinger og immunstimulerende midler, også af olieindustrien til at øge olieudbyttet, hvilket binder S. Commune i en bizar-feedback-loop til produktionen af hormonforstyrrende stoffer petrokemikalier er det i stand til at nedbryde og afhjælpe.

2 ~ Udvikl DIY og DIWO (gør det sammen med andre) protokoller, der forenkler disse modtagelser for at arbejde med EDC'er og svampe for at oversætte kodificeret videnskabelig viden til et sprog, der er mere tilgængeligt. Brug disse modtagelser til uddannelse, til at stille spørgsmålstegn ved, til modstand mod molekylære koloniseringer og til at skabe nye fortællinger om multispecies -tilblivelser og vores kollektive mutagenese.

3 ~ Udfordre den dominerende cisheteronormative, queerphobiske diskurs omkring hormonforstyrrende kemikalier (EDC'er). For at citere Malin Ah-King og Eva Haywards stipendium om emnerne: "Mange nyhedsmedier rapporterer disse skræmmende endokrine fortællinger fra vores baggårde. I et forsøg på at forgrunde disse spørgsmål-som vi vil beskrive i de følgende medier, har der været gang i en Frankenstein-metamorfose der truer sex og seksualitet. I stedet for at tage fat på de mange andre sundhedsrisici, der er forbundet med toksisk eksponering, står de mest sensationelle og polemiske spørgsmål til debat og kritisk reaktion. Det rejser spørgsmål: Hvorfor er sex mere centralt end kræft, autoimmun sygdom, og endda døden. Hvilke kulturelle nerver (hvoraf mange er globaliserede), udløses? Og for os med feministiske bekymringer, hvordan omorienterer vi debatten væk fra essentialisme, sexisme og heteronormativitet? " (Giftige køn).

Schizophyllum Commune er en unik "hvidt rådsvamp", idet den har vist sig at have over 28.000 genetiske køn. Denne tilpasning, mange teoretiserer, har muliggjort den utrolige genetiske mangfoldighed af denne art, der findes på alle kontinenter rundt om i verden undtagen Antarktis. Vi ønskede at fejre den smukke seksuelle mangfoldighed af denne organisme som et eksempel på biologiens skæbne. Den dominerende diskurs omkring EDC'er i medierne og endda fra miljøaktivister fokuserer stærkt på uvidenskabelige fortællinger, om at disse molekyler forårsager visse seksualiteter eller køn, som vores samfund patologiserer, mærker ikke-normative og ofte søger at eliminere eller undgå. Ikke alene er det sex-paniske, queer-fobiske fokus i offentligt opråb om EDCs videnskabeligt urealistiske (hormoner og hormonforstyrrende stoffer ikke gør folk queer eller trans), men det ignorerer alle de ødelæggende virkelige effekter, som vi kan linke til EDC's: fedme, skjoldbruskkirtlen, visse kræftformer, blandt andre sundhedsrisici.

Trin 1: Find Schizophyllum Commune, der bor i dit samfund

Sterile kulturer af laboratoriekvalitet af Schizophyllum Commune kan købes for omkring $ 350 fra en mikrobiologisk kulturbank som ATCC … derfor har vi valgt at dyrke fra vilde svampe gratis:)

Jeg havde det let, fordi jeg havde læst om Schizophyllum Commune og tilfældigvis lagde mærke til, at det en dag voksede på et træ foran min lejlighed. Hvis du ikke er så heldig at ved et uheld falder over S. Commune i dit kvarter, vil du gerne gå til et skovområde for at søge efter "beslag" svampe, der vokser på sygeligt løvtræ (træer, der ligner, at de ikke gør det for godt) eller faldne træer. S. Commune er en af de mest almindelige eksisterende svampe rundt om i verden og kan findes stort set overalt, hvor der er hårdttræ at vokse på.

Mushroomobserver.org giver en stor detaljeret beskrivelse af, hvor og hvornår du sandsynligvis finder S. Commune, samt hvordan du identificerer det, og hvordan du undgår "look alikes", der kan føre til fejlidentifikation:

"IDENTIFIKATION: Schizophyllum kommune kan let identificeres ved sine splittede gæller, tætte hår og blæserformet hætte. Hætten er 1-4,5 cm bred og normalt en skal- eller blæserform med en grå til hvidlig overflade. Basidiosporer er 5-7,5 × 2 -3 mikrometer En lignende svamp kendt som "Crimped Gill" Plicaturopsis crispa er ikke så udbredt.

HABITAT: Schizophyllum commune vokser på hårdttræ ved hjælp af enzymer til at nedbryde lignin og forårsager "hvid rådne". Så det findes i de fleste træområder. Det kan findes året rundt på grund af dets evne til at tørre ud, rehydrere under bedre forhold og derefter fortsætte med at sporulere.

Denne svamp kan være parasitisk på træer med lille diameter, der er stresset af andre faktorer, såsom tørke.

SE LIKEDE: Plicaturopsis crispa eller "Crimped Gill" ligner Split Gill. Det har også en skal/blæserformet frugtlegeme. Hætten er dog rødbrun eller gulbrun, og undersiden er meget markant. Det har krympet vene som gæller, der er meget forskellige end de splittede gæller i Schizophyllum commune. Crimped Gill er mindre almindelig, men karakteristisk, når den findes."

Trin 2: Lav næringsplader til S. Commune vokser videre

For at isolere en kultur i S. Commune du har fundet, skal du bruge nogle petriskåle fyldt med mad til svampen. Maltekstrakt Agar er mad, der er let at lave til S. Commune, eller "næringsmedier", der kan laves med let tilgængelige ingredienser. Det er også en god fødekilde at bruge, når man laver enzymatiske assayforsøg med S. Commune og andre hvide eller brune rotssvampe ~ ~ denne proces vil blive dækket af en anden instruerbar.

BEMÆRKNING: Hvis du havde problemer med at finde S. Commune, er der mange andre svampe i samme familie, der kan dyrkes ved hjælp af de samme processer og er lige så gode, hvis ikke bedre til at nedbryde hormonforstyrrende forurenende stoffer. Turkey Tail (Trametes Versicolor) er blevet fundet i mange undersøgelser, der så på hundredvis af hvide og brune rådssvampe som de højeste producenter af de "lignocellulosiske" enzymer, der nedbryder petrokemisk forurening. Østerssvampe er også meget gode til dette.

Jeg udfører mit mikrobiologiske arbejde i et samfundsbiologisk laboratorium kaldet BUGSS (Baltimore Underground Science Space), hvor jeg har adgang til glasvarer, digitale vægte, graduerede cylindre, en autoklav (til varme- og tryksterilisering af medierne) osv. Labs som denne har opstod rundt om i verden i det sidste årti, så du vil måske tjekke denne liste for at se, om der er en i nærheden af dig. Hvis du ikke har et fantastisk community lab som dette i dit område, skal du investere i noget grundlæggende udstyr til denne proces, såsom:

1 ~ En digital skala til at måle dine ingredienser præcist

2 ~ Et trykkoger til sterilisering af dine medier med varme og damp

3 ~ Petriskåle, kan købes online ret billigt, genanvendeligt glas eller engangsplast vil fungere, men genanvendelse er altid bedre:)

4 ~ Nogle glasvarer til at blande dine ingredienser i, sterilisere og opbevare.

Hvis du ikke vil investere i det udstyr, kan du finde forhældte maltekstraktagarplader at købe på websteder som Amazon ~ det bliver bare dyrere i det lange løb, hvis du planlægger at fortsætte med at udføre mikrobiologisk arbejde.

Der er allerede mange gode guider og youtube -videoer om, hvordan du laver dine egne petriskåle til næringsmedier derhjemme. Så i stedet for at gå i detaljer med dette, vil jeg bare linke til et par - og give opskriften på 2% maltekstraktagar, som er det næringsmedium, du vil bruge.

Freshcap Musrooms: Guide til hvordan man laver agarplader til dyrkning af svampe derhjemme

Mykoweb: Kom godt i gang med svampedyrkning

Maltekstrakt Agar Teknisk datablad

2% maltekstraktgar (MEA) ~~ Opskrift på 1 liter:

20 g Maltekstrakt (almindelig forsyning af øl, kan købes online)

15 g Agar (størkningsmiddel - dette bruges til at lave mad med ofte, så det kan købes online eller i nogle købmandsforretninger)

1 liter H20 (jeg bruger normalt vand med omvendt osmose, som kan købes i de fleste købmandsforretninger i gallonkander)

Denne opskrift kan let ændres, hvis du vil lave mindre mængder. Jeg laver ofte for eksempel kun 250 ml ad gangen, så jeg ender kun med at bruge 5 gram maltekstrakt, 3,75 gram Agar og 250 ml vand.

Trin 3: Uskyld din petriskål med svampe

Den svamp, du ser, kaldes "frugtkroppen", den er kun en lille del af organismen. Størstedelen af dets krop er skjult i træet (eller i jorden) og forbruger træet. Denne del af svampen kaldes myceliet. Til kultur Schizophyllum Communes hvide trådformede, tentakulære, rhizomatiske, myceliske krop på en petriskål, tager du en prøve af stammen, steriliserer og lægger på dine MEA -tallerkener. Mycelium vil vokse fra den steriliserede svampestamme kerneprøve og kolonisere petriskålen, der ligner en hvid bomuldsmåtte.

Du skal bruge:

• Malt -ekstrakt -agarpladerne (MEA), du forberedte i det foregående trin
• 70% isopropylalkohol (sprit) og en sprayflaske
• Papirhåndklæder
• Skalpel eller bare en barbermaskine i rustfrit stål vil fungere
• metal pincet
• handsker
• En flamme - jeg bruger en alcohaul lampe til sterilisering af instrumenter, NonDisjunction har en god vejledning i, hvordan man laver en her.
• Steril overflade at skære på (jeg brugte lige en steril petriskål til dette)
• Parafilm, en paraffinfilm, der bruges til at forsegle petriskåle - du kan også bare bruge malertape, hvis du ikke har dette

STERIL TEKNIK:

Det vigtigste, du vil huske på, når du prøver at bruge steril teknik, er at bakterier og sporer kontinuerligt falder i luften, så du vil holde dine petriskåle dækket så meget som muligt. Når du løfter lågene for at hælde medier eller yde, er det altid bedst at holde låget lige over fadet, så du kan få adgang til det indvendige vandret, men holde låget over fadet for at forhindre bakterier i at falde i. For det andet kan du er et kæmpe konglomerat af mennesker, bakterier, svampe og andre organismer ~ ~ selvom du ikke kan se det, omgiver du dig af en tæt sky af mikrober, der spredes ud af din krop. I stedet for bare at sidde på overfladen af din hud, strækker dit mikrobiom sig ud i luften ~ ~ sååååå, du må aldrig bølge dine hænder over petriskålen eller læne dig over det åbne fad for at kigge ind. Og brug handsker, hvis du har dem;)

Opret din halvstereile arbejdsplads

Vælg en ikke-porøs arbejdsflade fri for affald og uønsket. Sprøjt området ned med din 70% isopropylalkoholopløsning og tør det af med et køkkenrulle. Placer din flamme i midten af dit arbejdsområde og tænd den. Du vil arbejde så tæt på flammen som muligt, fordi det skaber et lille sterilt felt omkring det. Læg dine MEA -plader på den ene side og din svampeprøve på en steril skæreoverflade på den anden side. Jeg bruger normalt en steril petriskål som min sterile skæreoverflade samt værktøjsstøtte. Hæld lidt isopropylalkohol i et lille glas - du vil bruge dette til at sterilisere dit blad og en pincet, mens du arbejder.

*¡~ INOKULERE ~!*

Inden du gør noget, skal du sterilisere din klinge og pincet ved at dyppe dem ned i isopropylalkoen og derefter holde dem lidt over flammen. Efter sterilisering, hvile dem på din sterile skæreoverflade, hvis du sætter dem ned. Brug pincetten til at holde svampestammen stille og skære en bid af enden af den. Tag denne klump og skær alle siderne, så du ender med en lille terning af svampestammekerne med alle de ydre overflader fjernet. Dette hjælper med at slippe af med alle de andre mikrober, der lever på svampen, så de ikke forurener din kultur. Dyp derefter stængelkernen i isopropylen i cirka 30 sekunder, træk den ud, og lad den tørre inden for flammens sterile felt (brug ikke flammen til at tørre den, dette vil dræbe svampen). Flamme steriliser din pincet igen, mens du venter på, at stilkkernen tørrer. Løft derefter låget på en af dine MEA -plader lige nok til at skubbe pincetten ind fra siden, og brug den steriliserede pincet til at placere stængelkernen i midten af pladen. Forsegl pladen med parafilm, og i løbet af de næste par uger skal du se S. Commune mycelium kolonisere pladen.

Jeg laver normalt flere plader, når jeg arbejder med vilde prøver, så hvis jeg får forurening, er det mere sandsynligt, at jeg har mindst en ren kultur.